1.腎大部分切除法

(1)復(fù)制方法  體重250g左右成年大鼠，經(jīng)腹腔按30mg/kg體重的劑量注射戊巴比妥鈉麻醉，麻醉后大鼠行仰臥固定，腹部備皮、消毒，沿左腹旁切口切開(kāi)皮膚，暴露左側(cè)腎臟，切開(kāi)上、下極的包膜，上下極分別切除腎臟的1/3，用明膠海綿壓迫創(chuàng)面止血，生理鹽水沖洗，常規(guī)手術(shù)縫合肌層和皮膚，關(guān)閉腹腔。一周后，大鼠用同樣方法麻醉后仰臥固定，沿右腹旁切口切開(kāi)皮膚，暴露右側(cè)腎臟，結(jié)扎腎蒂后，切除右腎，常規(guī)手術(shù)縫合切口，關(guān)閉腹腔。造模前后將模型大鼠置于代謝籠收集24h尿液，測(cè)定24h蛋白定量；按實(shí)驗(yàn)預(yù)定時(shí)間取靜脈血樣測(cè)定血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)；麻醉后放血法處死動(dòng)物，取動(dòng)物殘腎組織標(biāo)本，置固定液固定，石蠟包埋，作常規(guī)組織切片，HE染色，光鏡下觀察。

(2)模型特點(diǎn)  術(shù)后大鼠傷口無(wú)出血和感染，但體重明顯下降，活動(dòng)與進(jìn)食量減少，體毛疏松。造模后1周動(dòng)物可出現(xiàn)蛋白尿，血清尿素氮、肌酐和24h尿蛋白逐漸升高；術(shù)后6周模型動(dòng)物進(jìn)入腎功能代償期，機(jī)體出現(xiàn)電解質(zhì)紊亂、貧血(RBC、HGB和HGT降低，耳、尾蒼白)及血壓顯著升高；8周時(shí)血壓可達(dá)到腎血管性高血壓標(biāo)準(zhǔn)；術(shù)后10周時(shí)模型動(dòng)物組血清尿素氮、肌酐、24h尿蛋白、血壓均顯著升高，血壓可達(dá)到13.7kPa 140mmHg以上。鏡下病理組織學(xué)觀察顯示，腎小球小球毛細(xì)血管擴(kuò)張，內(nèi)皮細(xì)胞肥大并伴有足突水腫融合，腎小球出現(xiàn)中到重度系膜增生，局灶節(jié)段性腎小球玻璃樣變性及硬化，伴小管間質(zhì)單核淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。

(3)比較醫(yī)學(xué)  腎大部分切除后殘余在腎單位中有血液動(dòng)力學(xué)改變，可引起殘存腎單位的高濾過(guò)蛋白尿，終會(huì)損害腎小球引起腎硬化，導(dǎo)致腎小球硬化為主要特點(diǎn)的 CRF。本模型以腎小球肥大、硬化為主要特點(diǎn)，符合腎小球高度濾過(guò)致腎衰學(xué)說(shuō)，模型表現(xiàn)較為接近臨床實(shí)際，且具有制備方法簡(jiǎn)便易行，穩(wěn)定性及重復(fù)性好，應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。但本模型需要作兩期手術(shù)，易引起動(dòng)物發(fā)生出血等不良反應(yīng)甚至死亡，模型制備時(shí)間長(zhǎng)，手術(shù)不易標(biāo)準(zhǔn)化。目前腎大部分切除CRF模型，除5/6腎切除模型外，采用3/4、4/5、7/8腎切除法均可制備CRF模型。但不同的腎切除模型其發(fā)生腎功能衰竭時(shí)間，血肌酐、尿素氮、尿蛋白含量變化，腎組織病理?yè)p傷均各有特點(diǎn)。本模型對(duì)臨床上CRF(具有減輕腎組織灌注、高濾過(guò)、抑制系膜細(xì)胞增殖、抗氧化作用)的藥物治療及降壓藥物干預(yù)時(shí)機(jī)的選擇有實(shí)用價(jià)值。

2.腎動(dòng)脈分支結(jié)扎加切除法

(1)復(fù)制方法  體重為200～300g成年大鼠，經(jīng)腹腔按30mg/kg體重的劑量注射戊巴比妥鈉麻醉，麻醉后大鼠行仰臥固定，腹部手術(shù)區(qū)常規(guī)消毒、去毛，沿左腹旁作切口切開(kāi)皮膚，進(jìn)腹后暴露左側(cè)腎臟，在手術(shù)顯微鏡下分離腎動(dòng)脈，保留左腎數(shù)支動(dòng)脈中的一支，結(jié)扎其余的分支，常規(guī)手術(shù)縫合切口，關(guān)閉腹腔。2d后，用同樣方法麻醉進(jìn)腹，4-0絲線結(jié)扎右腎腎門(mén)區(qū)，切除右腎，手術(shù)關(guān)腹。造模前后將模型大鼠置于代謝籠收集24h尿液，測(cè)定24h蛋白定量；按實(shí)驗(yàn)預(yù)定時(shí)間取靜脈血樣測(cè)定血肌酐(SCr)、血尿素氮(BIJN)；麻醉后放血法處死動(dòng)物，取動(dòng)物腎組織標(biāo)本，置固定液固定，石蠟包埋，作常規(guī)組織切片，HE染色，光鏡下觀察。

(2)模型特點(diǎn)  術(shù)后大鼠傷口無(wú)出血和感染，體重明顯下降，活動(dòng)與進(jìn)食量減少，體毛稀疏不齊。模型大鼠術(shù)后血肌酐、血壓明顯升高，并可出現(xiàn)蛋白尿，結(jié)扎腎出現(xiàn)代償性肥大；鏡下病理組織學(xué)觀察可見(jiàn)，與腎大部切除CRF模型類(lèi)似的。腎小球玻璃樣變性及硬化的病理變化。本模型制作方法與腎大部分切除術(shù)相似，結(jié)扎后殘余腎臟多為1/6、1/12、1/16，即相當(dāng)于切除5/6、11/12、15/16腎臟。

(3)比較醫(yī)學(xué)  采用本方法復(fù)制的模型，出血較腎大部切除CRF模型輕，但制備方法需要顯微外科技術(shù)，手術(shù)復(fù)雜且難掌握，模型動(dòng)物死亡率高、術(shù)后高血壓顯著，腎臟病理?yè)p傷嚴(yán)重。本模型可制作不同病變程度的CRF模型，與臨床病變表現(xiàn)相似，適用于藥物治療不同程度CRF時(shí)，藥物劑量和療效的評(píng)價(jià)。

3.冷凍加切除法

(1)復(fù)制方法  術(shù)前測(cè)定無(wú)蛋白尿，體重為200～300g的成年雄性大鼠，經(jīng)腹腔按30mg/kg體重的劑量注射戊巴比妥鈉麻醉，麻醉后大鼠俯臥固定于手術(shù)板上，背部手術(shù)區(qū)常規(guī)消毒與去毛，作背左側(cè)切口分離肌層，暴露左腎，用左手食指從腹部相應(yīng)部位輕輕向上頂起，腎臟即滑出皮膚切口外面，剝離腎筋膜，將預(yù)先浸入液氮瓶?jī)?nèi)的冷刀依次在動(dòng)物左腎的上、下極及外側(cè)前、后四個(gè)部位冷凍，每處冷凍40s，然后復(fù)位腎臟，分層縫合手術(shù)切口。2周后按同樣方法麻醉，作二期手術(shù)，結(jié)扎腎蒂，切除右腎。術(shù)后6～12周即可制備成穩(wěn)定的CRF模型。按實(shí)驗(yàn)預(yù)定時(shí)間分別采血作血液生化測(cè)定，并取左腎組織標(biāo)本，經(jīng)固定液固定后，作常規(guī)組織切片，置光鏡下檢查。

(2)模型特點(diǎn)  術(shù)后動(dòng)物無(wú)傷口感染及出血，但體重明顯下降，食量及活動(dòng)量減少，體毛疏松不齊。術(shù)后2周模型動(dòng)物血肌酐、血尿素氮即開(kāi)始升高，呈進(jìn)行性發(fā)展；4～6周血肌酐、血尿素氮可達(dá)到高峰，并維持在高峰數(shù)值上下波動(dòng)。鏡下病理組織學(xué)觀察顯示，腎小球肥大、玻璃樣變性及硬化，系膜基質(zhì)增生肥厚。

(3)比較醫(yī)學(xué)  本模型是針對(duì)腎大部切除法建立CRF模型時(shí)，對(duì)手術(shù)操作要求高、易出血等缺點(diǎn)而設(shè)計(jì)的。雖然制作方法較腎大部切除法CRF模型簡(jiǎn)單，但腎臟冷凍損傷的程度，包括冷刀在液氮中的時(shí)間、冷刀在腎表面放置的范圍、接觸面大小均可影響模型病變程度，而造成差異，造模時(shí)應(yīng)有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。本模型可通過(guò)控制冷凍時(shí)間來(lái)制備不同病變程度的CRF，且術(shù)中無(wú)出血危險(xiǎn)，但制作時(shí)需要特殊設(shè)備，同時(shí)仍不能排除原位壞死組織誘導(dǎo)的免疫機(jī)制參與。本模型適用于臨床上對(duì)CRF藥物治療及篩選方面的研究。

4.電凝加切除法

(1)復(fù)制方法  體重為25g左右的成年小鼠，經(jīng)腹腔按30mg/kg體重的劑量注射戊巴比妥鈉注射麻醉，麻醉后小鼠俯臥固定于手術(shù)板上，背腹部手術(shù)區(qū)常規(guī)消毒與去毛，作背右側(cè)切口，暴露右腎，剝離其周?chē)窘M織及腎包膜；用針形電燒灼器電凝除腎門(mén)周?chē)?mm組織外的整個(gè)右腎表面，深度約1mm；將燒灼后的腎臟放回腹腔，常規(guī)手術(shù)縫合肌層與皮膚，手術(shù)過(guò)程控制在10min左右。然后于12～15d后行第2次手術(shù)，依同樣方法麻醉，進(jìn)腹后用絲線結(jié)扎左腎腎門(mén)，切除左腎，手術(shù)關(guān)閉腹腔。模型成模過(guò)程約需18周。按實(shí)驗(yàn)預(yù)定時(shí)間分別采血作血液生化測(cè)定，并取腎臟組織標(biāo)本，經(jīng)固定液固定后，作常規(guī)組織切片，置光鏡下檢查。

(2)模型特點(diǎn)  造模手術(shù)后如模型動(dòng)物傷口無(wú)出血、裂開(kāi)和感染，一般可在1周內(nèi)自行愈合。電灼后1周內(nèi)模型動(dòng)物體重明顯下降，進(jìn)食與活動(dòng)減少，體毛疏松，觀察期間體重增長(zhǎng)減緩。造模后第2周可出現(xiàn)貧血，血尿素氮、血肌酐升高，血尿素氮測(cè)定值高可為造模前的4倍；尿量及尿蛋白含量增加，模型動(dòng)物可出現(xiàn)甲狀旁腺功能亢進(jìn)如高血壓、低血鈣、堿性磷酸酶升高等臨床表現(xiàn)。肉眼觀察電凝腎表面蒼白，腫脹變形；鏡下病理學(xué)觀察顯示，18周時(shí)模型動(dòng)物腎組織內(nèi)大部分腎皮質(zhì)壞死、萎縮，腎小球、腎小管組織結(jié)構(gòu)破壞消失，腎間質(zhì)纖維化。

(3)比較醫(yī)學(xué)  采用電燒灼方法可導(dǎo)致模型動(dòng)物腎臟的腎皮質(zhì)壞死，造成大部分腎小球、腎小管組織結(jié)構(gòu)破壞，引發(fā)殘余腎單位的功能代償性增強(qiáng)，終形成以腎小球硬化，腎間質(zhì)組織纖維化為主要特點(diǎn)的CRF。本模型制作方法簡(jiǎn)便，可一次大批量制作；模型特征穩(wěn)定可靠，可達(dá)中、重度 CRF程度，模型成功率高；且手術(shù)方法不易出血、感染，并且有類(lèi)似于人類(lèi)慢性腎衰的客觀指標(biāo)。采用本方法可制備出同樣的大鼠CRF模型，且能獲得較小鼠更多的采血量用于指標(biāo)檢測(cè)。本模型適用于臨床上CRF藥物治療、篩選及評(píng)價(jià)方面的研究。